T-SPOT.TB 在艾滋病并肺结核诊断中的价值分析

  肺结核为艾滋病常见、多发性感染疾病，超过30% 的艾滋病患者死于肺结核 [1]。当前，结核感染临床诊断的金标准是结核菌培养，但该方法用时较长，且检测阳性率较低，无法及时准确的对患者进行诊断[2]。Ｔ细胞斑点试验 (T-SPOT.TB) 是一种用于结核感染检测的新技术，其原理是检测机体是否存在分泌IFN-γ 的 Mtb 抗原特异性Ｔ淋巴细胞，进而判断机体是否感染结核疾病 [3]。我院自 2011 年 1 月开始使用T-SPOT.TB 对艾滋病患者是否感染肺结核进行诊断，效果满意。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料  收集 2011年1月至2014年6月间我院收治的53例艾滋病并肺结核患者作为观察组，46 例艾滋病无肺结核患者作为对照组。患者均经艾滋病初筛和确诊试验确诊。观察组肺结核的诊断则依据《肺结核诊断和治疗指南》，且参照患者症状、影像学、细菌学结果。观察组 53 例：男 29 例，女 24 例；年龄26~72 岁，平均(46.1±13.4) 岁。对照组46 例：男 28 例，女 18 例；年龄 28~70 岁，平均 (45.2±14.7) 岁。

1.2 方法  患者取 5ml 外周静脉血，加入肝素抗凝，分离外周血单个核细胞 (PBMC)。加入 AIM-V 培养液，调整细胞浓度至 2.5×106/ml。取已包被抗 IFN-γ 抗体微量板，加入 50μl AIM-V 至阴性对照孔，加入50μl 植物血凝素 (PHA) 至 PHA 对照孔，加入 50μl结核分枝杆菌特异抗原 A(ESAT-6) 至 A 检测孔，加入 50μl 抗原 B(CFP-10) 至 B 检测孔。各孔分别加入100μl 2.5×105/ml 的 PBMC 溶液，置于 5%CO2 培养箱中，37℃下培养 20h。用 PBS 洗脱，各孔分别加入50μl 标记过的 IFN-γ 抗体，4℃下孵育 1h，PBS 洗脱，加入 50μl 底物进行显色，室温下孵育 7min，纯水洗涤终止反应。对各孔颜色斑点数进行计数。判断标准：①当阴性对照孔的点数＜ 6 时，( 检测孔点数 -阴性对照孔点数 ) ≥６为阳性；②当阴性对照孔的点数≥６时，检测孔点数 > 阴性对照孔的 2 倍为阳性。

1.3 统计学方法 以 SPSS19.0 进行统计学处理。计数资料以 χ2 检验。P<0.05 差异有统计学意义。

2 结果

2.1两组阳性率比较  观察组 T-SPOT.TB 试验阳性率为 81.1%(43/53)，对照组 T-SPOT.TB 试验阳性率为 15.2%(7/46)。两组比较差异有统计学意义(χ2=42.802，P=0.000)。

2.2T-SPOT.TB 诊断艾滋病并肺结核的价值 对 T-SPOT.TB 诊断艾滋病并肺结核的价值进行了分析：灵敏度为 86.0%，特异度为 79.6%，阳性预测值为81.1%，阴性预测值为 84.8%。

2.3CD4+ 计 数 对 T-SPOT.TB 阳 性 率 的 影 响将观察组患者依据 CD4+ 水平分为两组。CD4+ 计数

≥ 200/μl 患 者 18 例，T-SPOT.TB 试 验 阳 性 率 为83.3%(15/18) ；CD4+ 计数 <200/μl 患者 35 例，T-SPOT.TB 试验阳性率为 74.3%(26/35)。两组比较差异无统计学意义 (χ2=0.577，P=0.448)。

3 讨论

肺结核临床为艾滋病患者常见的机会感染疾病，同时也是艾滋病患者死亡的原因。因此，对肺结核进行及时、准确的诊断，并制定有效的治疗及抗逆转录病毒方案，对患者预后非常重要。但肺结核患者临床缺乏典型影像学表现，痰细菌检测的阳性率低，临床检测常出现漏诊和误诊 [4]。因此，有效的检测方法一直受广大医师的关注。T-SPOT.TB 试验是由酶联免疫斑点技术发展起来的结核感染检测新技术，检测原理为：患者发生结核感染后，分泌产生记忆性的 T 淋巴细胞，给予结核相关抗原的刺激，记忆性 T 淋巴细胞可快速转增殖为效应性的Ｔ淋巴细胞，并会分泌出IFN-γ，因此对 IFN-γ 的数目进行检测，就可以判定机体是否发生结核感染 [5]。国内外研究显示，普通人群 T-SPOT.TB 试验对结核感染诊断的准确率超过了 90%[6-8]。童学成等 [9] 的研究中，使用 T-SPOT.TB 试验对 45 例并发肺结核艾滋病患者进行了诊断，其诊断准确率达到了 80%，显著性高于未合并肺结核患者的 13.3%。陈仁芳等 [10] 使用 T-SPOT.TB 试验对 26例并活动性肺结核艾滋病患者进行了诊断，其准确率达到了 92.3%，显著高于未合并活动性肺结核患者的16.7%。这些结果提示了，T-SPOT.TB 试验可对艾滋病患者是否感染结核进行诊断。

本研究对合并肺结核和未合并肺结核的艾滋病患者进行了 T-SPOT.TB 试验，结果显示：观察组阳性率为81.1%(43/53) 显著高于对照组的 15.2%(7/46)。本组进一步研究了 T-SPOT.TB 对艾滋病并肺结核的诊断价值，结果显示：T-SPOT.TB 的灵敏度为 86.0%，特异度为 79.6%，阳性预测值为 81.1%，阴性预测值为84.8%。本组研究结果提示，T-SPOT.TB 可有效对艾滋病并肺结核进行诊断，具有较高的灵敏度和特异度。

在进一步研究中，我们探讨了机体免疫状态诊断结果的影响，发现：CD4+ 计数≥ 200/μl 患者诊断阳性率为83.3%(15/18) 与 CD4+ 计数 <200/μl 患者诊断阳性率74.3%(26/35) 比较，无明显差异。提示了机体免疫状态对检测结果影响不大。综上所述，T-SPOT.TB 试验可对艾滋病并肺结核进行有效诊断，具有较高的敏感度和特异度。

参考文献：

[1]林艳荣 , 许丁空 , 汤卓 , 等 .HIV/TB 双重感染与 HIV 阴性结核病结核分枝杆菌耐多药现状分析 [J]. 中国艾滋病性病 ,2010,16(3):236-238.

[2]苏娟 . 九江地区献血人群 HIV 感染现状调查研究 [J]. 医学检验与临床 ,2011, 22(03):65-66.

[3]欧阳晖 , 陈柏林 .T 细胞酶联免疫斑点法对艾滋病合并结核病患者的诊断价值研究 [J]. 实用预防医学 ,2010 ,17(10):1950-1953.

[4]Leung CC, Yam WC, Yew WW, et al. T-SPOT.TB out performs tuberculin skin test in predicting tuberculosis disease[J]. Am J Respir Crit Care Med, 2010, 182(6): 834-840.

[5]施伎蝉 , 蒋贤高 , 朱海燕 , 等 . T 细胞斑点试验对菌阴肺结核的诊断价值 [J]. 中华临床感染病杂志 ,2012,5(2):108-109.

[6]Lalvani A, Pareek M. Interferon gamma release assays: principles and practice [J]. Enferm Infecc Microbiol Clin, 2010, 28(4): 245-252.

[7]陆迪雅 , 陈澍 . Ｔ淋巴细胞酶联免疫斑点法在肺外结核诊断中的应用 [J]. 中华传染病杂志 ,2013,31(6): 377-381.

[8]祁燕伟 , 白劲松 , 万荣 , 等 . Ｔ细胞斑点试验在人类免疫缺陷病毒合并肺结核感染中不同Ｔ细胞水平临床诊断价值[J]. 昆明医学院学报 ,2011,32(9): 63-67.

[9]童学成 , 陈国春 , 濮翔科 , 等 . 结核感染Ｔ细胞斑点试验对艾滋病合并肺结核的临床诊断价值 [J]. 中华医院感染学杂志 ,2014,24(14): 3632-3634.

[10]陈仁芳 , 杨琦恩 , 陆宇红 , 等 . T-SPOT.TB 在艾滋病合并结核感染诊断中的应用 [J]. 江苏医药 ,2014,40(5): 532-534.